L’agent chimiluminescent utilisé pour la luminescence est très différent !
October 23 , 2024
La technologie des tests immunologiques par chimiluminescence est connue depuis longtemps dans le domaine du diagnostic in vitro ! Il s'agit notamment de la chimiluminescence directe, de l'électrochimiluminescence, de la chimiluminescence enzymatique et de la chimiluminescence indirecte. Tant de types de luminescence utilisent des agents luminescents qui sont eux aussi très différents ! 1. Ester d'acridine
Chimiluminescence directe
L'ester d'acridine (AE) est un composé organique tricyclique sensible à l'oxydation. Lorsqu'il est oxydé par H2O2 dans des conditions alcalines, il émet une lumière d'une longueur d'onde de 470 nm et a une efficacité lumineuse élevée. Son produit excité, la N-méthylacridone, est la luminite du système réactionnel de luminescence. Il est utilisé pour le marquage des haptènes et des protéines ou des anticorps polyclonaux ou monoclonaux.
Il s’agit d’une substance synthétique qui n’existe pas dans la nature, il n’y a donc pas d’interférence de bruit de fond ; L'ester d'acridine est relativement insensible aux changements de pH et de température. Dans le même temps, son poids moléculaire n'est que de 481, l'effet d'encombrement spatial est faible et la réaction d'oxydation n'a pas besoin de catalyseur, tant qu'elle peut être réalisée dans un environnement alcalin.
La luminescence réagit rapidement et a un faible fond. Pendant la réaction d'oxydation, le conjugué est décomposé, de sorte que la luminescence de l'ester d'acridine libre n'est pas inhibée et que le réactif a une bonne stabilité. C'est un excellent choix d'agent luminescent dans l'industrie.
La térapridine ruthénium [RU(bpy)3]2+ est un agent électrochimiluminescent qui s'oxyde avec la tripropylamine donneuse d'électrons (TPA) à la surface de l'anode. Marquage direct d'antigènes ou d'anticorps.
La luminescence se caractérise par une émission lumineuse stable de seulement 0,01 ms, atteignant un pic à 300 ms, et le cycle d'électrochimiluminescence de centaines de milliers de cycles par seconde améliore considérablement la sensibilité de l'analyse.
Le marquage est stable et facile à contrôler, mais le champ électrique nécessite une cellule de mesure spéciale, et il faut 40 à 60 secondes pour nettoyer la cellule de mesure après chaque mesure afin de remettre l'électrode dans l'état facile à provoquer. la contamination croisée, affecte l'exactitude des résultats et réduit la vitesse d'analyse.
3.Luminol et ses dérivés
Chimiluminescence enzymatique
Le luminol (3-aminobenzoylhydrazide), l'isoluminol (4-aminobenzoylhydrazide) et leurs dérivés ont des propriétés chimiluminescentes.
En solution neutre : généralement présents sous forme d'ions dipolaires (zwitterions).
En solution alcaline : il devient un anion divalent, qui peut être oxydé par des molécules d'oxygène en un intermédiaire pouvant produire un phénomène de chimiluminescence.
Dans les oxydants : le luminol est converti en un état excité, qui se désintègre jusqu'à l'état fondamental et devient fluorescent.
4. adamantane AMPPD
Chimiluminescence enzymatique
En général, la structure adamantane est très stable, mais lorsque la phosphatase alcaline est rencontrée, la phosphatase alcaline catalysera l'adamantane pour éliminer le groupe phosphate afin de former un intermédiaire instable, qui se décomposera automatiquement et produira un signal lumineux de 470 nm, qui peut durer pendant quelques dizaines de minutes à plusieurs heures.
5. Chimiluminescence photoinduite
particularité
Temps de réaction court : un modèle de réaction homogène.
Haute sensibilité : le processus de réaction est amplifié étape par étape et la luminescence améliore rapidement la sensibilité.
Bonne stabilité : l'ensemble du processus de génération, de transfert et d'amplification d'énergie (lumière) est très stable et n'est pas facilement affecté par le pH, la force ionique et la température.